着床前遺伝学的検査（PGT）では、胚（成長中の受精卵）の一部を採取することで染色体を検査します。わずか0.1mmほどの胚からどのように細胞を採取し検査に出すのでしょうか。TE生検（TE-biopsy）と呼ばれるこの高度な技術をご紹介します。

1. TE生検とは
2. 実際の操作説明
① 胚盤胞培養
② 道具
③ 流れ（当院におけるTE生検の手法）
3. TE生検の影響
4. まとめ

1. TE生検とは

「TE(trophectoderm)」とは胚盤胞期の胚を構成する細胞のうち、将来“胎盤”になる細胞のことです。
「生検(biopsy)」とは「細胞や組織を検査すること」を意味しています。

図1.胚盤胞の模式図

胚盤胞期の胚は将来赤ちゃんになる細胞塊であるICM (inner cell mass)と胎盤になるTEとに分かれており、PGTではTE細胞のみを採取して検査に出します。

2. 実際の操作説明

① 胚盤胞培養
TE生検では胚盤胞期胚を用いるため、受精卵を培養し育てる必要があります。胚盤胞は培養5日目以降になることが多く、全ての胚が胚盤胞まで成長するとは限りません。また形態が不良でTE生検に適さないものは実施対象外となる場合もあります。

② 道具
細胞を採取するためには細胞サイズに合う器具が必要となります。
Biopsyピペット(内径30μm)というガラス器具を使用しTE細胞を採取します。

また透明帯の開孔やTE細胞の切断にはLAH（レーザー孵化促進法）の器材を搭載した顕微鏡も必要となります。

その他にも胚操作や切断後の細胞片を操作するガラスピペット、検体を保存するPCRチューブが必要であり、術者のDNA混入を防ぐために手袋を着用して実施します。

図2. 細胞片を入れるための小さなPCRチューブ（右）

③ 流れ（当院におけるTE生検の手法）
a. ICM（将来赤ちゃんになる細胞）が左側に来るよう胚を保持します
b. ICMの反対側の透明帯に穴を開け、biopsyピペットを透明帯内に侵入させます（事前に透明帯に穴を開けていた場合は生検実施時にTE細胞の一部が透明体外へ飛び出ている状況になります（図3）

図3. a,b　ICM側を保持する

c. TE細胞を約5細胞（検査に必要な細胞数の目安）吸引します
d. 切断する細胞接着部を引き延ばし、レーザーを当てて接着を外します

図4. c,d　TE細胞のみをbiopsyピペットで吸引し、切断する箇所にレーザーを照射する

e. 保持用ガラスとbiopsyピペットを使い切断します
f. 保持していた胚盤胞は凍結保存し、切り離した細胞は検査に出します

図5. e　ガラス器具同士を擦り合わせ弾くことで細胞接着部を切断する

3. TE生検の影響

操作内容でもわかるように、TE細胞を吸引することやレーザーを当てて切り離すなどの物理的なダメージは避けられません。また、凍結保存している胚盤胞をTE生検する際にはTE生検をしない場合と比べ1回分凍結融解が多くなることが胚にとって負担となる可能性もあります。

TEを構成する細胞数が少ない胚の場合、胚全体に占める5細胞の割合は大きく、大きな損失となります。

また、同じ胚のTEとICMをそれぞれ検査した結果が一致しない例も報告されています。1)
TE生検は胚全体のごく一部を検査しているため、必ずしもICMや胚全体の結果と一致するとは言えないのです。
1) Victor, A.R. et al. Human Reproduction, 2019,

4. まとめ

TE生検を実施しPGT-AやPGT-M、PGT-SRなどの着床前遺伝学的検査を受けることは、妊娠の成立や、重篤な遺伝性疾患を予防することに役立ちます。

侵襲性を考慮し、TEを採取せずに遺伝学的検査を行う方法が世界中で模索されていますが、未だ確立された方法はありません。

今できる最良のことは、よりダメージの少ないTE生検を目指してTE生検の技術を最大限に磨いていくことです。